肾脏病与男科杂志

来源文章
:2018  |  :5   |  问题 :1  |  :32--36

不同尿路感染动物双色球基本走势图表图专家引起的肾间质纤维化的比较


顾向晨,韩世生,徐振宇,岑洁,陈敏,王一 
 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院肾内科

通讯地址:
王怡博士
上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院肾内科上海
中国

抽象

目标: 为了确定一种更好的动物双色球基本走势图表图专家,该双色球基本走势图表图专家更像人类中长期发生的长期反复尿路感染(UTI)引起的早期肾间质纤维化,我们对三种不同的鼠双色球基本走势图表图专家进行了比较。 方法: 建立了三种不同的上尿路感染的鼠双色球基本走势图表图专家,包括将细菌直接注射到肾组织中,由部分单侧输尿管阻塞引起的尿路感染上升以及细菌向膀胱中的反复输注。通过苏木精和曙红染色评估肾脏的组织病理学。马森's三色染色和immunohistochemistry for α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达用于检测纤维化。 结果: All three models developed different levels of inflammation in the kidney. However, in contrast to the severe renal interstitial fibrosis in the other two models, the model of repeated infusion of bacteria into the bladder demonstrated early renal interstitial fibrosis by 马森's三色染色和immunohistochemistry for α-SMA. 结论: 细菌向膀胱中反复输注的双色球基本走势图表图专家发展为低水平的肾间质纤维化,这类似于人类复发性UTI引起的早期肾脏组织损伤。因此,该双色球基本走势图表图专家可以提供更好的方法来研究炎症引起的肾间质纤维化的早期治疗干预。



如何引用本文:
顾X,韩S,徐Z,岑J,陈敏,王瑜。不同动物双色球基本走势图表图专家尿路感染引起的肾间质纤维化比较.J肾病学杂志2018; 5:32-36


如何引用此URL:
顾X,韩S,徐Z,岑J,陈M,王Y.不同动物双色球基本走势图表图专家尿路感染引起的肾间质纤维化的比较。 J Integr Nephrol Androl [在线丛书] 2018 [引用 2021年1月30日]; 5:32-36
可从: http://www.topworldnet.com/text.asp?2018/5/1/32/228498


全文



 Introduction



尿路感染(UTI)被称为人类最常见的细菌感染之一,也是导致肾组织损害和肾功能衰竭的主要原因,主要表现为肾间质纤维化和肾小球硬化。[1],[2],[3然而,缺乏相关双色球基本走势图表图专家系统阻碍了由复发性尿路感染引起的肾间质纤维化的研究。已经进行了许多尝试来建立类似于人类中发生的疾病的鼠双色球基本走势图表图专家。长期以来,一直将细菌直接注射到肾皮质作为UTI的既定双色球基本走势图表图专家。[4]但是,该双色球基本走势图表图专家与感染和创伤相结合,绝对不同于UTI的自然发展。此外,多年以来已知,在幼儿中,先天性阻塞性尿毒症引起肾盂肾炎,并导致发育异常和肾衰竭。[5],[6],[7]因此,概括实际的膀胱输尿管反流-介导的尿路感染,输尿管阻塞是在细菌注入膀胱之前进行的。[8]几项研究表明,该双色球基本走势图表图专家可损害肾功能并促进肾间质纤维化。[9],[10],[11]有趣的是,解剖畸形并不是肾瘢痕形成的先决条件。众所周知,由于身体结构和荷尔蒙变化,妇女罹患UTI的风险最高。[12],[13],[14] {Benador,1994#6}然而,大多数被诊断出患有UTI的妇女没有严重的形式回流。因此,现有的动物双色球基本走势图表图专家不能很好地模拟由复发性UTI引起的肾间质纤维化的发展。这项研究检查了一种新型的小鼠双色球基本走势图表图专家,该双色球基本走势图表图专家是通过不经手术操作将细菌反复膀胱内滴入膀胱而建立的,目的是提供一种更好的类似于人类自然疾病进展的小鼠双色球基本走势图表图专家。

 材料和方法





大肠埃希氏菌菌株0111B4(CMCC No.44155)。

动物双色球基本走势图表图专家

一名12周大的雌性Sprague–道利大鼠重180–200克(中国上海)随机分为六组(n=10 /组)。大鼠可以随意进食典型的大鼠食物和自来水,并以最佳的温度和湿度饲养,光照/黑暗周期为12小时。动物的使用和所有实验程序均得到上海中医药大学伦理委员会的批准,并遵循国家研究委员会关于实验动物的护理和使用的指南。

双色球基本走势图表图专家1

该双色球基本走势图表图专家的建立如上所述。[15]在0.35 L / kg诱导下的麻醉下10%腹膜内注射水合氯醛,切开右侧纵向后侧切口,暴露右侧输尿管。根据先前描述的技术,右输尿管的上三分之一通过两条9-0丝线缝合在腰肌中,导致部分单侧输尿管阻塞。腹部分为两层。手术后200 μl浓度为1的大肠杆菌×使用无菌的24号氟乙烯丙烯导管通过尿道将109 cfu / mL注入每只大鼠的膀胱。拔下导管后,将大鼠放回笼中。对照组的大鼠被注入生理盐水。

双色球基本走势图表图专家2

该双色球基本走势图表图专家如先前所述建立。[16]如上用水合氯醛将大鼠腹膜内麻醉,使用中线腹部切口暴露右肾,然后200μl of 1 ×使用24号针头将109 cfu / ml大肠杆菌悬浮液直接注射到大鼠的右肾皮质。对照组的大鼠仅注射生理盐水。

双色球基本走势图表图专家3

200μl浓度为1的大肠杆菌×如上所述,在用水合氯醛麻醉后,使用无菌的24号氟乙烯-丙烯导管将109cfu / mL滴入大鼠的膀胱。每周两次两次膀胱内滴注大肠杆菌,持续6周。对照组的大鼠被注入生理盐水。

肾脏组织学

感染六周后,处死所有大鼠以进行组织学检查。取出肾脏并固定在4个%多聚甲醛,包埋在石蜡中,切成4片μm sections. Hematoxylin and eosin (H and E) and 马森'然后进行三色染色。间质纤维化和炎症的评估以盲法进行,在× 400 magnification.

免疫组织化学

α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色如前所述。[17]简要地,4μ从石蜡包埋的组织制备的肾组织的m个切片中,脱石蜡,并用H2O2灭活内源性过氧化物酶。然后用2阻塞切片%正常山羊血清在磷酸盐缓冲液(PBS)中在室温下放置10分钟,然后与兔抗大鼠一起孵育α-SMA抗体(1:200,Santa Cruz,Dallas,TX,USA)在4°C过夜。将切片用PBS洗涤并与二抗(山羊抗兔,1:1000,Life Technologies,Grand Island,NY,USA)温育1小时。过氧化物酶标记的链霉亲和素和二氨基联苯胺底物显示阳性染色。免疫化学染色的阴性对照通过用PBS替代一抗进行。

 Results



三种尿路感染动物双色球基本走势图表图专家的组织病理学

在双色球基本走势图表图专家1中,右肾小,严重肾损害包括肾小管萎缩和扩张,间质浸润程度由淋巴细胞和单核细胞组成。在双色球基本走势图表图专家2中,右肾在充满炎性细胞的大肠杆菌注射部位表现出楔形皮质间质瘢痕,进行性肾组织破坏几乎没有任何正常结构。在双色球基本走势图表图专家3中,肾脏结构几乎正常,肾脏间质弥漫性单核细胞浸润[图1]。{图1}

Fibrosis level as assessed by 马森's trichrome staining

马森'三色染色显示双色球基本走势图表图专家1中右肾弥漫性纤维化,纤维化取代了延髓和皮质大面积的小管。与双色球基本走势图表图专家2相反,间质纤维化仅在注射部位发展,伴随细胞外基质的产生和积累。值得注意的是,在双色球基本走势图表图专家3中,与其他两个双色球基本走势图表图专家相比,肾脏仅表现出轻微的局灶性间质纤维化[图2]。{图2}

α尿路感染的三种动物双色球基本走势图表图专家中肌平滑肌肌动蛋白的表达

免疫染色后,使用Image J软件(NIH,Bethesda,MA,美国)对肾纤维化进行分析,以测量α-SMA. We found that α在所有三种动物双色球基本走势图表图专家中,SMA的表达均增加,其中染色最多见于肾间质。此外,与双色球基本走势图表图专家1和2相比,将细菌反复输注到膀胱中的双色球基本走势图表图专家(双色球基本走势图表图专家3)更能代表复发性UTI引起的肾间质纤维化的早期阶段[图3]。{图3}

评论

尿路感染是一个重要的健康问题,发病率和患病率很高。[18]由于身体的结构和荷尔蒙的变化,众所周知,女性比男性更容易患UTI,尤其是处于绝经和绝经后的女性。[12],[13],[14]复发性UTI会影响心理健康和心理健康。女性一生中的生活。此外,它经常伴有膀胱输尿管和肾脏反流,导致慢性肾盂肾炎,可引起严重的炎症,肾功能恶化和肾瘢痕形成,占19.8%。%–21.2%ESRD案例。因此,重要的是建立一个稳定的动物双色球基本走势图表图专家,该双色球基本走势图表图专家与复发性UTI引起的肾纤维化过程非常相似,以更好地研究UTI的进展和发展以及潜在的药物干预措施。

先前的研究表明,在许多动物双色球基本走势图表图专家中,大多数物种都对UTI具有抗药性,因此有必要使用外科手术或其他侵入性方法来增加尿路的敏感性。因此,模仿上泌尿道感染的常用动物双色球基本走势图表图专家可分为两种类型:将大肠杆菌或脂多糖(LPS)直接注射到肾脏中,以及在单侧输尿管阻塞后将大肠杆菌滴注到膀胱中。米勒和菲利普斯最初证明了第一种双色球基本走势图表图专家,将大肠杆菌或LPS直接注射到薄壁组织中[4],它引起严重的炎症和纤维化,被认为是肾盂肾炎的经典双色球基本走势图表图专家,并已用于许多研究中。然而,炎症和纤维化局限于注射区域,这与肾盂肾炎的自然发生过程完全不同,即由于外科手术。对于后一种双色球基本走势图表图专家,一些研究已经使用单侧输尿管阻塞来触发动物双色球基本走势图表图专家中的升尿路感染。布鲁克斯等人[9]开发了一种在大鼠左输尿管周围有经皮环并在将大肠杆菌滴入膀胱后出现一般性输尿管阻塞的双色球基本走势图表图专家。 Bitz等[10]在大鼠中,将左输尿管完全阻塞24小时,然后在输尿管阻塞释放后立即进行细菌接种。 Zeidan等人开发的另一种方法。由右部分输尿管阻塞和经尿道感染的大肠杆菌(E. col i。)组成[15]。所有这些动物双色球基本走势图表图专家都证明了先前存在的输尿管阻塞和尿路感染对肾损害发生的影响。但是,有时发现,在这种UUO动物双色球基本走势图表图专家中,诱导的纤维化太严重,无法通过药物干预。此外,膀胱输尿管反流可能不能解释组织反应性和炎症的各种差异。因此,Svensson等[19]在膀胱内注射UTI的UTI双色球基本走势图表图专家中使用mIL-8Rh-/-小鼠,由于中性粒细胞功能障碍,导致急性细菌性肾盂肾炎和肾瘢痕形成。粘膜,无创感染,无阻塞或先前组织损伤后,mIL-8Rh-/-小鼠出现肾脏瘢痕形成。[19]但是,此双色球基本走势图表图专家的主要缺点是不容易访问。

 Conclusions



为了建立更好的上尿路感染动物双色球基本走势图表图专家,我们开发了一种方法,每周两次将大肠杆菌重复滴入膀胱,共6周。结果证实该动物双色球基本走势图表图专家也能够引起肾脏发炎。此外,马森还发现了纤维化's三色染色和α-SMA通过免疫组织化学染色。有趣的是,纤维化水平不如其他两个测试的双色球基本走势图表图专家严重。因此,我们认为研究炎症引起的肾间质纤维化的早期治疗干预是一种新颖而有用的动物双色球基本走势图表图专家。

致谢

这项工作得到了国家自然科学基金会(81774106,YW),上海中医药大学高峰医院和XG的高远临床研究基金以及上海中医药发展三年行动计划(ZY3-JSFC)的资助。 -2-2018(MC)。

财政支持和赞助

零。

利益冲突

没有利益上的冲突。

参考文献

1约翰逊JR,罗伯茨PL,斯塔姆WE。 P 菌毛和其他毒力因子 大肠杆菌 尿糖:与患者的关联'特征。感染杂志1987; 156:225-9。
2Otto G,Sandberg T,Marklund BI,Ulleryd P,Svanborg C.猪中的毒力因子和pap基因型 大肠杆菌 从患有或没有菌血症的急性肾盂肾炎妇女中分离得到。 Clin Infect Dis 1993; 17:448-56。
3库宁CM。肾脏感染会导致肾衰竭吗? Ann Rev Rev Med 1985; 36:165-76。
4Miller T,Phillips S.肾盂肾炎:感染,肾脏瘢痕形成和抗菌治疗之间的关系。肾脏国际1981; 19:654-62。
5林桂Y,邱新台,陈明杰,赖春,黄洁洁,王永天, 。小儿第一发热性尿路感染的急性肾盂肾炎和肾疤痕后遗症。 Pediatr Nephrol 2003; 18:362-5。
6浮士德WC,迪亚兹M,波尔HG。肾盂肾炎后瘢痕形成的发生率:对二巯基琥珀酸文献的荟萃分析。 J Urol 2009; 181:290-7。
7Benador D,Benador N,Slosman DO,NussléD,Mermillod B,Girardin E, 。皮质闪烁显像术评估小儿肾盂肾炎肾实质的变化。 J Pediatr 1994; 124:17-20。
8Hodson CJ,Maling TM,McManamon PJ和Lewis MG。反流性肾病(慢性萎缩性肾盂肾炎)的发病机制。 Br J Radiol 1975;增刊13:1-26。
9Brooks SJ,Lyons JM和Braude AI。预防逆行性肾盂肾炎。一,产生严重上升的实验双色球基本走势图表图专家 大肠杆菌 大鼠无菌血症的肾盂肾炎。 Am J Pathol 1974; 74:345-58。
10Bitz H,Darmon D,Goldfarb M,Shina A,C座,Rosen S, 。暂时性尿道阻塞易导致肾盂肾炎和肾小管间质疾病的发展:在大鼠中的研究。 Urol Res 2001; 29:67-73。
11汉森(Hansen)MH,王拜(Wang BY),阿夫扎尔(Afzal N),博尼奥(Boineau)FG,路易(Lewy)JE,肖特利夫(Shortliffe LM), 。尿路感染对大鼠双色球基本走势图表图专家中输尿管盂结连接的影响。泌尿外科2003; 61:858-63。
12Haider G,Zehra N,Munir AA,HaiderA。妊娠期尿路感染的危险因素。 J Pak Med Assoc 2010; 60:213-6。
13Weissenbacher ER,Reisenberger K.孕妇和非孕妇的单纯性尿路感染。 Curr Opin Obstet Gynecol 1993; 5:513-6。
14Trivalle C,Martin E,Martel P,Jacque B,Menard JF,Lemeland JF, 。 B组老年人链球菌菌血症。微生物医学杂志1998; 47:649-52。
15Zeidan S,El Ghoneimi A,Peuchmaur M,Bingen E,Bonacorsi S.在小鼠双色球基本走势图表图专家中,部分输尿管阻塞和细菌毒力对肾瘢痕形成的影响。泌尿外科2012; 80:486.e1-7。
16一野M,黑柳Y,草坂M,森T,石川K,白木R, 。在上尿路感染的大鼠双色球基本走势图表图专家中,尿中性粒细胞明胶酶相关的脂蛋白水平升高。 J Urol 2009; 181:2326-31。
17高X,黄L,Grosjean F,Esposito V,吴J,傅L, 。补充了酮酸的低蛋白饮食可降低5/6肾切除大鼠的肾脏疾病严重程度:KLF1​​5的作用。肾脏国际2011; 79:987-96。
18Foxman B.尿路感染的流行病学。 Nat Rev Urol 2010; 7:653-60。
19Svensson M,Irjala H,Alm P,Holmqvist B,Lundstedt AC,Svanborg C, 。易感染的mIL-8Rh-/-小鼠肾脏瘢痕形成的自然史。肾脏国际2005; 67:103-10。